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產(chǎn)品說明：

產(chǎn)品描述：

Polybrene（聚凝胺，hexadimethrine bromide）是一種多聚陽離子聚合物，常用于哺乳動物細胞的DNA轉染實驗以增強脂質體的轉染效率。Polybrene目前廣泛用于逆轉錄病毒介導的基因轉染，慢病毒介導的基因轉染，作用機理可能是通過中和細胞表面唾液酸與病毒顆粒之間的靜電排斥從而促進吸附作用。Polybrene也是一種有名的抗肝素劑（肝素拮抗劑），常用來生產(chǎn)非特異性凝集的紅細胞。另外Polybrene也多用于蛋白測序，因為小劑量的Polybrene在自動測序分析可明顯改善多肽的降解現(xiàn)象。PVDF膜加入polybrene還能提高膜的親和性。

本產(chǎn)品以溶液形式提供，粉末用0.9% NaCl配制成10 mg/mL的溶液，并用0.22 μM濾膜過濾除菌。使用時一般按1:1000-1：2000稀釋，依細胞種類不同稀釋比例不同，具體查閱相關文獻。

操作步驟(僅供參考，具體使用濃度請參考相關文獻)

注：Polybrene對某些細胞（如末端分化的神經(jīng)元，DC細胞）毒性較大，初次應用建議先做毒性測試。

實驗1：逆轉錄病毒感染（Retroviral Infection）
（1） 重組逆轉錄病毒原液的制備：取5 mL生長培養(yǎng)基（5%血清）加入含單層轉染逆轉錄包裝細胞的100 mm培養(yǎng)盤內。孵育24 h后，吸去培養(yǎng)液并用0.45 μm濾器過濾。

（2）待感染細胞的培養(yǎng)：100 mm培養(yǎng)盤內加入10 mL完全培養(yǎng)基，細胞密度為5×10⁵/盤。
（3）病毒感染：細胞培養(yǎng)24 h后，吸去完全培養(yǎng)液。用含polybrene的2 mL病毒上清 （或將病毒原液稀釋到2 mL）感染細胞，polybrene的終濃度為5-10μg/mL。37°C孵育3-6 h。

（4）收集病毒顆粒：加入8 mL完全培養(yǎng)基。感染3天后，按照1:5的比例用選擇培養(yǎng)基裂解細胞。

實驗2：轉染

（1）完全生長培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞，培養(yǎng)細胞密度約50%；
（2）孵育細胞18-24 h后準備DNA-培養(yǎng)基- Polybrene混合液，按如下操作制備混合液：①添加完全培養(yǎng)基（60 mm培養(yǎng)皿2 mL，100 mm培養(yǎng)皿3 mL），37°C預熱；②添加10 ng~10 μg質粒輕輕混勻；③加入Polybrene至終濃度為5-10 μg/mL。輕輕混勻。以上每個成分需要按順序加入。
（3）去除培養(yǎng)基，在細胞中加入DNA-培養(yǎng)基-Polybrene溶液，在37°C孵育細胞6-20 h。細胞培養(yǎng)的前6 h內約每1.5 h輕柔混勻。
（4）去除DNA-培養(yǎng)基-Polybrene溶液。用DMSO shock solution（15%DMSO in 1×HBSS）輕輕蓋住細胞（60 mm培養(yǎng)皿3 mL，100 mm培養(yǎng)皿4 mL）。每次加入溶液時用手輕晃培養(yǎng)盤10 s，使得液體均勻分布。然后37°C孵育細胞4 min。
（5） 立即去除DMSO shock solution，用完全生長培養(yǎng)基輕輕清洗細胞2次。對于60 mm培養(yǎng)皿每次用5mL培養(yǎng)液清洗，100 mm培養(yǎng)皿每次用10 mL培養(yǎng)液清洗。

（6）加入完全培養(yǎng)基到細胞中；

（7）穩(wěn)定轉化：去除生長培養(yǎng)基，按照1:5的比例用選擇培養(yǎng)基裂解細胞。

 瞬時表達：去除生長培養(yǎng)基，加入新鮮的生長培養(yǎng)基。24-72 h后收獲細胞。

注意事項：

為了您的安全和健康，請穿實驗服并帶一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應用或其他用途。